提供一種 FITC標記蛋白的使用方法

1.制備溶于0.1M碳酸鈉緩沖液( pH 9.0 )的待標記蛋白溶液,濃度≥2mg/ml.

2 )溶解FITC于無水DMSO配制成1mg/ml的溶液。

3 )對于1ml蛋白溶液加入50μFITC溶液,可按照每次5μ的量邊加邊輕輕攪拌蛋白溶液;

4 )待所需FITC加入完畢,將反應液于4°C避光孵育8h ;

5 )加入NH4CI使其終濃度*50mM , 4°C終止反應2h ;

6)加入二甲苯青*濃度0.1% ,甘油*濃度5% ;

7 )通過大小孔徑合適的凝膠過濾層析分離排除未被結合的FITC ,分離范圍在20,000*50,000 (球蛋白例如抗體)。待凝膠柱平衡后,將以上反應混合波從柱頂注入，

打開凝膠柱,待其全部流入柱床后,加入PBS緩沖液。

此時,可以形成兩條帶: a,快速移動帶,也就是FITC-蛋白標記物,先被洗脫,通常于室內光下可看到; b,慢速移動帶,也就是未結合蛋白的FITC和二=甲苯青。僅僅在PBS緩沖液清洗后被洗脫出來。

8 )于4°C避光儲存上述偶聯物,加入0.1% ( w/v )疊氮化鈉作為-種防腐劑。若蛋白濃度較低( < 1mg/ml) , 可加入1%BSA作為-種蛋白穩定劑。

9)標記物中熒光素和蛋白的比值( F/P )可通過測定495nm和280nm處的吸光值來鑒定, F/P應位于0.3-1.0。小于該比例則信號太低，高于該比例則背景太高。

西安齊岳生物提供HRP/FITC/Rhodamine/CY3標記的各種蛋白，人血清白蛋白HSA、鏈霉親和素Streptavidin、標記親和素 Avidin、胰島素 Insulin、偶聯刀豆球蛋白A Concanavalin A、標記鬼筆環肽 Phalloidin、CY3-重組蛋白A Recombinant Protein A、標記雞卵白蛋白 Ovalbumin、修飾人轉鐵蛋白 Transferrin、牛血清白蛋白BSA、質量穩定，純度大于99%，可以提供COA和核磁、HPLC圖譜報告，2周內如遇質量問題無條件退換貨。

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用途：科研

狀態：固體/粉末/溶液

產地：西安

儲存時間：1年

保存：冷藏

廠家：西安齊岳生物科技有限公司