標(biāo)記基因目的是為檢測(cè)目的基因是否成功導(dǎo)入，由于一般都是有“鳥槍法”導(dǎo)入的目的基因，所以成功率并不是很高,目的基因的檢測(cè)和篩選就顯得很有必要。

　　例如：大腸桿菌的某種質(zhì)粒具有青霉素抗性基因，當(dāng)這種質(zhì)粒與外源DNA組合在一起形成重組質(zhì)粒，并被轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞后，就可以根據(jù)受體是否吸飽具有青霉素抗性來判斷受體細(xì)胞是否獲得了目的基因，當(dāng)人們用選擇培養(yǎng)基(比如含有青霉素的培養(yǎng)基)，來培養(yǎng)受體細(xì)胞時(shí)，能夠在培養(yǎng)基中存活下來的受體細(xì)胞就可以認(rèn)為是成功的導(dǎo)入了外源DNA，標(biāo)記基因就起作用了。

　　擴(kuò)展資料

　　理想的報(bào)告基因通常具備如下基本要求：

　　1、受體細(xì)胞中不存在相應(yīng)內(nèi)源等位基因的活性;

　　2、它的產(chǎn)物是**的，且不會(huì)損害受體細(xì)胞;

　　3、具有快速、廉價(jià)、靈敏、定量和可重復(fù)性的檢測(cè)特性。目前常用的報(bào)告基因有氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因(cat)、熒光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)等。

　　熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光物質(zhì)。熒光物質(zhì)是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)它們被紫外線或藍(lán)紫光照射時(shí)，它們可以被刺激成刺激狀態(tài)。當(dāng)基態(tài)從刺激狀態(tài)恢復(fù)時(shí)，它們會(huì)發(fā)出熒光。熒光標(biāo)記技術(shù)是指利用熒光物質(zhì)的共價(jià)組合或物理吸附在所需研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用其熒光特性提供被研究對(duì)象的信息。熒光標(biāo)記的無放射性污染、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，使得熒光標(biāo)記在許多研究領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

　　熒光標(biāo)記物質(zhì)也廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)功能研究、**篩選等領(lǐng)域。人們使用熒光標(biāo)記肽來檢測(cè)目標(biāo)蛋白的活性，并將其開發(fā)的高通量活性篩選方法應(yīng)用于**篩選和**開發(fā)(如各種激酶、磷酸酶、肽酶等)。因此，多肽的熒光裝飾也是多肽合成領(lǐng)域的重要組成部分。

　　以下是一些常用的多肽裝飾熒光材料：

　　以下是一些熒光物質(zhì)的激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)：

　　1.FITC修飾

　　異硫氰酸熒光素(FITC)活性高。一般來說，在固相合成過程中引入這種熒光基團(tuán)比其他熒光素更容易，在反應(yīng)過程中不需要添加活化試劑。

　　FITC修飾的多肽通常有兩種形式：

　　(1)將FITC連接到整個(gè)肽鏈的末端，并在FITC之前連接到一分子ACP(6-氨基己酸)，也稱為烷基間隔器。在反應(yīng)中，F(xiàn)ITC與肽鏈上暴露的-NH2反應(yīng)提供了六個(gè)碳直鏈空間，大大降低了反應(yīng)的空間位阻，提高了反應(yīng)效率，降低了反應(yīng)難度。其次，F(xiàn)ITC還與肽結(jié)構(gòu)中的-SH、側(cè)鏈-NH2反應(yīng)，ACP的加入也降低了這種副反應(yīng)的可能性。此外，當(dāng)多肽在酸性環(huán)境條件下切割時(shí)，在N端連接到FITC的多肽需要通過環(huán)化形成熒光素，這通常伴隨著最后一個(gè)氨基酸的切除，而烷基間隔器ACP的訪問避免了這種情況。

　　(2)整個(gè)肽中的Lys側(cè)鏈連接到FITC，Lys側(cè)鏈?zhǔn)墙K端為-NH2的四碳直鏈烷基，直接起到降低空間位阻的作用。這種裝飾可以靈活地在整個(gè)肽的任何位置進(jìn)行FITC裝飾，而不僅限于終端。

　　兩種形式的FITC修飾多肽具有操作簡(jiǎn)單、成功率高、分離純化方便等優(yōu)點(diǎn)。

　　2.AMC修飾

　　7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)是一種廣泛使用的熒光標(biāo)記試劑，如酶的痕量測(cè)定、酶的識(shí)別、激光染料的制備等。此外，C端用香豆素修飾的泛素分子也是研究蛋白質(zhì)泛素過程的重要探索。

　　與其他熒光染料不同，AMC修飾多肽分子從C端進(jìn)行：(1)AMC與肽鏈C端的**個(gè)氨基酸反應(yīng);(2)固相合成整個(gè)肽鏈(從**個(gè)氨基酸開始)，保留整個(gè)肽鏈的側(cè)鏈保護(hù)基和最后一個(gè)氨基保護(hù)基;(3)液相縮合AA-AMC和全保護(hù)肽鏈;(4)切除保護(hù)基，完成肽鏈的裝飾。

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