FITC-D-Lys熒光探針的標(biāo)記原理是什么？

FITC-D-Lys 是由異硫氰酸熒光素（FITC）與 D-賴氨酸通過共價鍵結(jié)合形成的熒光探針，主要用于生物標(biāo)記和檢測領(lǐng)域。以下是綜合分析：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與標(biāo)記原理

核心組成?

FITC?：具有異硫氰酸酯基團（-NCS）的綠色熒光染料，激發(fā)波長約 495nm，發(fā)射波長約 520nm。

D-賴氨酸?：賴氨酸的 D-型立體異構(gòu)體，側(cè)鏈含氨基，具有獨特的生物正交性。

連接方式?：FITC 的異硫氰酸酯基團與 D-賴氨酸側(cè)鏈氨基通過親核加成-消除反應(yīng)形成硫脲鍵（-NH-CS-NH-）。

物理化學(xué)性質(zhì)?

溶解性?：溶于水、DMSO 等極性溶劑，微溶于乙醇。

儲存條件?：需避光保存于 -20℃，防止降解。

純度標(biāo)準(zhǔn)?：純度 ≥95%，標(biāo)記率 ≥90%。

二、主要應(yīng)用場景

細胞成像與代謝研究?

通過 LAT1 轉(zhuǎn)運體進入細胞，追蹤 D-賴氨酸的代謝路徑。

標(biāo)記活細菌細胞壁，用于革蘭氏陽性/陰性菌的實時成像。

蛋白質(zhì)工程與標(biāo)記?

標(biāo)記重組蛋白的非天然氨基酸位點，研究蛋白質(zhì)折疊與功能。

用于熒光示蹤蛋白-蛋白相互作用。

生物傳感與檢測?

結(jié)合納米材料構(gòu)建熒光探針，檢測 pH、金屬離子等。

流式細胞術(shù)分析細胞活性及代謝狀態(tài)。

三、制備與純化方法

反應(yīng)條件?

pH 范圍?：8.0-9.0（碳酸氫鈉緩沖液）。

摩爾比?：FITC 與 D-賴氨酸按 1:1 或 1:2 混合。

反應(yīng)時間?：室溫下避光反應(yīng) 1-2 小時。

純化技術(shù)?

凝膠過濾?：使用 Sephadex G-25 去除未反應(yīng) FITC。

HPLC?：反相 C18 色譜柱分離產(chǎn)物。

四、技術(shù)優(yōu)勢與局限性

優(yōu)勢?

D-構(gòu)型避免天然代謝干擾，提升標(biāo)記特異性。

熒光強度隨 pH 變化的特性適用于溶酶體成像。

挑戰(zhàn)?

需優(yōu)化細胞穿透效率及深部組織成像能力。

需評估探針的細胞毒性與生物相容性。

五、注意事項

實驗設(shè)計?：需設(shè)置對照組以排除熒光干擾。

儲存與使用?：DMSO 溶液避光儲存不超過一個月。