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Cyanine3 NHS ester；Cyanine3 NHS; cy3 NHS；Cy3 NHS ester；Cy3-NHS;

Cy3 NHS Ester

中文名：Cy3-N-羥基琥珀酰亞胺酯

英文別名（English Synonym）:Cyanine 3, monosuccinimidyl ester

分子量（Molecular Weight）:829.03

外觀（Appearance）:紫色固體

Ex/Em:555nm/565nm

溶解性（Solubility）:溶于DMSO，DMF

Cyanine3 NHS ester

Cyanine 3（Cy3），是花青素熒光素染料家族的成員之一，是化學合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以兩種異構體的形式供貨，一種是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines），一種是磺化花青素（sulfonated cyanine）。兩者的光譜性質幾乎一致，因此大部分應用可相互替換，比如，都可用于標記DNA或蛋白等生物分子。兩者的主要區別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標記反應體系內不需要使用有機共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強標記效率。

Cyanine 3（Cy3）是以磺化染料的形式供貨，易溶于水，Ex=555 nm，Em=565 nm，具有明亮熒光，光穩定性強，pH非敏感性等優點，適用于標記多肽、蛋白以及核酸等生物分子，以通過后續熒光成像以及其他熒光生物學方法分析目的蛋白。

Cy3 NHS ester，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團的Cy3，可直接與生化分子上的氨基（-NH2）反應形成穩定的酰胺鍵，主要是伯胺。

運輸和保存方法

冰袋運輸。-20℃干燥避光保存，**期1年。

注意事項

1）NHS ester基團對濕度非常敏感，務必干燥保存產品。使用前產品需放到室溫回溫至少20min。

2）NHS ester基團的水解發生在水溶性緩沖體系屬于競爭性反應。對蛋白/多肽（濃度：1-1mg/ml）伯胺的連接反應建議在pH 7-9范圍內進行。使用不含氨基的緩沖體系，pH 7-9。比如100 mM 磷酸鈉，150 mM 氯化鈉， pH 7.5； 100mM Hepes, pH 7.5。100 mM 碳酸鈉/碳酸氫鈉, pH 8-9；或100mM 硼酸緩沖液, pH 8-9。

3）不要使用含伯胺的任何緩沖液，比如Tris，甘氨酸。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

純度：98%

產地：西安

供應商：西安齊岳生物科技有限公司

說明：提供使用說明，核磁圖譜，包裝，價格，產地，制備方法，應用，穩定性，溶解度，簡單合成等各種信息

僅用于用于科研，不能用于人體試驗

使用方法（用Cy3-NHS Ester 標記抗體）

注意：可參考本方法進行多肽，蛋白或者其他分子的標記，需要根據具體的實驗體系對合適的標記緩沖體系，樣本濃度，染料濃度等參數做出合適的調整。

1）用不含氨基的合適的緩沖液（eg.100mM磷酸鈉，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗體使其濃度達到1-5mg/mL。【注】：如抗體中有殘留Tris或 glycine 污染，則需透析或者脫鹽到合適的緩沖液內。

2）使用前，用適量去離子水或者無水DMSO溶解Cy3-NHS，使其摩爾濃度為抗體摩爾濃度的400倍，例如，待標記的IgG濃度為1mg/mL（eg 6.7µM），則溶解后Cy3-NHS的濃度為2.7mM；如待標記的IgG濃度為2.5mg/mL，則溶解后Cy3-NHS的濃度為6.75mM；

3）向抗體中加入適量Cy3-NHS試劑，以達到預期的標記效率。【注】：當用Cy 3 NHS ester標記抗體或其他蛋白，亮度最高的偶聯物其染料/蛋白的比率為4-12，取決于特定的應用。過高比率會增加非特異性背景，喪失抗體特異性結合，導致聚集。建議根據應用優化標記比率。

4）室溫孵育60min（或更長）；

5）利用合適緩沖液透析或脫鹽柱去除未反應的試劑；

6）分別在280nm和550nm檢測Cy3-抗體的吸光值；

7）測定Cy3標記效率（DOL）和標記濃度。