蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的使用方法和應(yīng)用方向（轉(zhuǎn)）

蛋白質(zhì)交聯(lián)劑分為三大類：同源交聯(lián)劑，異源交聯(lián)劑，光反應(yīng)交聯(lián)劑。

使用方法

圖示為同源交聯(lián)劑的使用方法：將待交聯(lián)的蛋白質(zhì)A與交聯(lián)劑在一定條件下反應(yīng)，得到的蛋白質(zhì)A-交聯(lián)劑中間體，然后移除多余的交聯(lián)劑，再加入欲交聯(lián)的蛋白質(zhì)B。產(chǎn)物中可能會(huì)形成多聚體，這一副產(chǎn)物通過調(diào)節(jié)反應(yīng)條件來控制。分成兩部反應(yīng)的目的在于減少分子內(nèi)交聯(lián)以及形成蛋白質(zhì)多聚物。另外，選擇異源交聯(lián)劑也可以減少多聚物的產(chǎn)生。

應(yīng)用

蛋白質(zhì)交聯(lián)劑已有廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)分支。

蛋白質(zhì)間相互作用研究

大多數(shù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合相互作用是瞬時(shí)的，通過交聯(lián)方法可以穩(wěn)定或永久連接相互作用復(fù)合物中的成分，從而有助于鑒別這些瞬時(shí)接觸。一旦相互作用的成分被共價(jià)偶聯(lián)，可以使用其他步驟（例如細(xì)胞裂解，親和純化和電泳）來制備分析樣品，同時(shí)可維持的相互作用復(fù)合物。

生物導(dǎo)彈研究（靶向**）

將能識(shí)別**表面抗原的抗體與**共價(jià)連接，實(shí)現(xiàn)靶向**，從而減少傳統(tǒng)化療方法對健康細(xì)胞的殺傷。

載體蛋白與半抗原的連接

半抗原只有反應(yīng)原性而沒有免疫原性。而將病毒包被蛋白的一段多肽序列（半抗原）可以和載體蛋白連接后制成疫苗，激發(fā)免疫反應(yīng)。另外也可以通過這種方法制備單克隆抗體，并利用此單抗返回找到大分子蛋白上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。在連接二者的操作中，較低的半抗原-載體蛋白摩爾比會(huì)帶來更高的抗體親和力。

此外將半抗原連接在載體蛋白中間的氨基酸上比連接在其末端時(shí)產(chǎn)生的的抗體效價(jià)更高。

蛋白質(zhì)或其他分子的固相化

將蛋白質(zhì)通過共價(jià)鍵結(jié)合在磁珠，96孔板，玻璃等等固體基質(zhì)上，以減少洗脫過程中的損失。

抗體的標(biāo)記、標(biāo)記轉(zhuǎn)移

將抗體與酶，熒光基團(tuán)或者生物素連接用于定量測量或者定位觀察。抗體標(biāo)記與修飾之前，需要用固定化的抗原純化。為了避免抗體結(jié)合抗原的位點(diǎn)被封閉，選擇抗體重鏈上合適位置的的氨基酸就比較重要。標(biāo)記酶可以連接在抗體鉸鏈區(qū)打開形成的二硫鍵上，或者或者抗體的非特異性片段上。

此外，還可以將抗體酶切，獲得抗原結(jié)合片段，然后將標(biāo)記基團(tuán)與抗原結(jié)合片段連接。這種方法的優(yōu)勢是在ELISA反應(yīng)中減少了Fc片段的干擾，并且也增加了這一復(fù)合物的膜通透性，使之更適合標(biāo)記活體細(xì)胞。左圖是將標(biāo)記基團(tuán)結(jié)合在鉸鏈區(qū)二硫鍵打開生成的巰基上。右圖是將標(biāo)記基團(tuán)直接結(jié)合在抗體結(jié)合片段上。

交聯(lián)是指將兩個(gè)或多個(gè)分子通過共價(jià)鍵化學(xué)結(jié)合的過程。 交聯(lián)劑包含具有反應(yīng)活性的末端，可與位于蛋白或其他分子上的特定功能基團(tuán)，如伯胺和巰基反應(yīng)。 蛋白和多肽上有多個(gè)化學(xué)基團(tuán)可用于交聯(lián)，因此蛋白和多肽可以作為偶聯(lián)的靶標(biāo)，用于使用交聯(lián)方法的研究中。

交聯(lián)劑用于確定鄰近蛋白間的關(guān)系以及配體-受體相互作用。 具有氨基反應(yīng)活性的同型雙功能的交聯(lián)劑：琥珀酰亞氨酯或亞氨酸酯、以及具有氨基反應(yīng)活性和光活化疊氮苯化合物的異型雙功能交聯(lián)劑是這些應(yīng)用中常用的交聯(lián)劑。

交聯(lián)劑也常用于修飾核酸、**和固相載體表面。 用于氨基酸和核酸表面修飾和標(biāo)記的化學(xué)原理是相同的。 該化學(xué)領(lǐng)域稱為生物偶聯(lián)，包括交聯(lián)、固定、表面修飾和生物分子標(biāo)記。