鏈霉親和素 - 生物素結(jié)合探針Biotin-Avidin用于熒光檢測

生物素與鏈霉親和素的結(jié)合是目前自然界中已知的比較強(qiáng)的非共價相互作用,正因?yàn)槿绱?該體系引起了各個領(lǐng)域研究人員的廣泛關(guān)注.生物素-親和素系統(tǒng)（Biotin-Avidin—System，BAS）是70年代末發(fā)展起來的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。近年大量研究證實(shí)，生物素—親和素系統(tǒng)幾乎可與目前研究成功的各種標(biāo)記物結(jié)合。生物素與親和素之間高親合力的牢固結(jié)合以及多級放大效應(yīng)，使BAS免疫標(biāo)記和有關(guān)示蹤分析更加靈敏。它已成為目前廣泛用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究的新技術(shù)。

靶標(biāo)激活的化學(xué)探針（target-activated chemical probes）是基礎(chǔ)生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷中監(jiān)測酶活性和反應(yīng)性小分子的重要工具。其中基于熒光開啟機(jī)制（turn-on）的探針可以分為兩類：基于染料的熒光探針（通過FRET, PET, AIE等方式開啟熒光）和caged-luciferin。

而在這篇文章中，作者發(fā)展了一種新型的turn-on化學(xué)探針，其中熒光開啟是基于鏈霉親和素-生物素結(jié)合（簡稱CBP）。CBP的原理是基于生物素與鏈霉親和素具有高的親和力（Kd = 10-14M），而在生物素的N-1氮上進(jìn)行化學(xué)修飾形成caged-biotin能**降低親和力（Kd=10-5 M），因此在沒有待測物的情況下，細(xì)胞上的CBP表面將不能與熒光團(tuán)修飾的鏈霉抗生物素結(jié)合。 而待測物的存在會觸發(fā)生物素decage，熒光團(tuán)修飾的鏈霉抗生物素將結(jié)合到生物素探針上。 因?yàn)樵谝粋€鏈霉親和素分子上有多個熒光團(tuán)，因此可以**地放大輸出信號。 同時，也可以根據(jù)實(shí)際情況在鏈霉親和素上結(jié)合不同的熒光團(tuán)，如Cy5，Cy3或Alexa488。與常規(guī)探針相比，CBP具有幾個優(yōu)點(diǎn)，如背景低，信號可以數(shù)倍擴(kuò)增，染料的選擇范圍寬。在這篇文章中，作者將該方法成功應(yīng)用于巨噬細(xì)胞表面分泌過氧亞硝酸鹽（ONOO）的成像。這種CBP探針的設(shè)計(jì)理念不僅可以用于熒光檢測，而且還可以應(yīng)用在各種其他檢測模式下，如電化學(xué)和酶放大發(fā)光檢測。

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