熒光標記多糖衍生物的研究進展
糖具有抗**、提高免疫力等多種生物學活性,是國內外研究的重要**來源.由于多糖沒有光吸收的基團,無法直接通過熒光分光光度計等設備檢測,因而將多糖進行熒光標記成為檢測多糖的重要方法.熒光標記技術分析多糖能夠具有較高的靈敏度和選擇性,其中異硫氰酸熒光素(FITC)在生化研究中應用較為廣泛.目前關于FITC標記多糖的研究頗為豐富,本文對相關研究進展進行了綜述.
1.應用
熒光標記的葡聚糖和其他多糖的衍生物，主要用于細胞和組織的滲透性和傳導研究。熒光檢測的另一個好處是，提供健康組織對應病變組織的滲透性定量數據。配合螢光顯微鏡檢查實時同步進行。該技術具有高靈敏度，即使組織液中樣本濃度低至1μg/ml，仍可檢測出。其他應用領域還包括**傳遞和微循環研究。熒光多糖衍生物也可以作為分子標志物，用于科研用試劑盒。經羧甲基(CM)或二乙基氨基乙(DEAE)修飾的熒光多糖，可用于研究電荷對滲透性的影響。賴氨酸修飾的衍生物為生物結合和固定提供了工具，可用于細胞和與之類似的組織保存。
2.微血管流量和腎小球濾過研究：
使用TdB的150KDa TRITC標記葡聚糖（紅色，用于微血管流量）和4KDa FITC標記葡聚糖（綠色，用于腎小球濾過），可以觀測活體大鼠腎臟的微循環血流量和腎小球透過。視頻開始部分展示的是位于周遭小管中間和交叉部位的腎小球（橙色），細胞內的細胞核呈青色。先緩慢注入分子量大的150 kDa TRITC標記葡聚糖，熒光強度隨著該物質在血流中擴散均勻分布逐漸變強繼而出現峰值。平衡后，注入分子量較小的4kDa FITC標記葡聚糖，快速通過腎小球濾過膜的屏障，沿著圍繞腎小球近端的小管移動。
3.產品組合：
ATTO(TM)標記產品：
FITC標記產品：FITC衍生物已用于多種生物應用超過40年。TdB生產平均分子量 4 kDa到2000 kDa的寬譜FITC-多糖衍生物產品 (490 nm/520 nm)。產品線包括葡聚糖、聚蔗糖、菊粉和其它多糖衍生物。
TRITC標記產品：TRITC衍生物 (550 nm/572 nm)包括了葡聚糖、透明質酸和聚蔗糖的衍生物。includes derivatives of dextran, hyaluronic acid and polysucrose. TdB生產分子量 4 kDa到2000 kDa 的TRITC-衍生物。與FITC相比，TRITC衍生物 pH依賴性較小。
4.熒光基團
產品線由超過30種不同產品構成，其中21種是帶熒光標記的 。提供多種不同熒光基團標記的葡聚糖和其它多糖衍生物。其中包括為人熟識的FITC標記（493nm/518nm）和TRITC標記（550nm/572 nm），其用于滲透率研究的歷史已經超過40年。產品目錄中還包括ATTO?-染料ATTO488標記 (502 nm/524 nm) 和ATTO647N標記 (46 nm/664 nm), 適合單分子檢測。還提供特有的紅移Antonia Red?標記 (583 nm/602 nm), 帶有明亮的熒光，優越的化學和光穩定性，并且對pH沒有依賴性。
5.質量
所有TdB提供的多糖衍生物都具有低的聚合分散度（PD）,意味著Mw/Mn之比接近于1。對于滲透性研究而言尤為重要，較低的聚合分散度使結果更為可靠，重現性更好。TdB熒光標記葡聚糖衍生物在聚合分散性方面優于競爭對手，詳參“Multiple factors influence glomerular albumin permeability in rats.” RM Sandoval et al., J Am Soc Nephrol, 2012 Mar, 23(3)447-57。
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