熒光標記蛋白的主要步驟（齊岳生物提供FITC標記蛋白的使用方法）

熒光標記蛋白的主要步驟

齊岳生物提供一種 FITC標記蛋白的使用方法

1.制備溶于0.1M碳酸鈉緩沖液( pH 9.0 )的待標記蛋白溶液,濃度≥2mg/ml.

2 )溶解FITC于無水DMSO配制成1mg/ml的溶液。

3 )對于1ml蛋白溶液加入50μFITC溶液,可按照每次5μ的量邊加邊輕輕攪拌蛋白溶液;

4 )待所需FITC加入完畢,將反應(yīng)液于4°C避光孵育8h ;

5 )加入NH4CI使其終濃度50mM , 4°C終止反應(yīng)2h ;

6)加入二甲苯青濃度0.1% ,甘油濃度5% ;

7 )通過大小孔徑合適的凝膠過濾層析分離排除未被結(jié)合的FITC ,分離范圍在20,000-50,000 (球蛋白例如抗體)。待凝膠柱平衡后,將以上反應(yīng)混合波從柱頂注入，

打開凝膠柱,待其全部流入柱床后,加入PBS緩沖液。

此時,可以形成兩條帶: a,快速移動帶,也就是FITC-蛋白標記物,先被洗脫,通常于室內(nèi)光下可看到; 

b,慢速移動帶,也就是未結(jié)合蛋白的FITC和二=甲苯青。僅僅在PBS緩沖液清洗后被洗脫出來。

8 )于4°C避光儲存上述偶聯(lián)物,加入0.1% ( w/v )疊氮化鈉作為-種防腐劑。若蛋白濃度較低( < 1mg/ml) , 可加入1%BSA作為-種蛋白穩(wěn)定劑。

9)標記物中熒光素和蛋白的比值( F/P )可通過測定495nm和280nm處的吸光值來鑒定, F/P應(yīng)位于0.3-1.0。小于該比例則信號太低，

西安齊岳生物提供酶HRP，熒光FITC，Biotin、Cy3、Cy5、Cy7、羅丹明等熒光物質(zhì)標記蛋白，標記位置是氨基，標記的蛋白有：牛血紅蛋白、膠原蛋白、鏈霉親和素、大鼠免疫球蛋白、牛胎球蛋白、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、重組蛋白G等幾十種蛋白，提供檢測圖譜。

齊岳生物供應(yīng)異硫氰酸熒光素;cas3326-32-7;FITC

5(6)-羧基熒光素（混合物）;cas72088-94-9;5(6)-FAM

5-羧基熒光素（單一化合物）;cas76823-03-5;5-FAM

6-羧基熒光素（單一化合物）;cas3301-79-9;6-FAM

5(6)-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（混合物）;cas117548-22-8;5(6)-FAM, SE

5-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（單一化合物）;cas92557-80-7;5-FAM, SE

6-羧基-2',4,4',5',7,7'-六氯熒光素琥珀酰亞胺酯 ;6-HEX, SE

6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基熒光素琥珀酰亞胺酯;cas113394-23-3;6-JOE, SE

6-羧基-2',4,7,7'-四氯熒光素琥珀酰亞胺酯 ;6-TET, SE

5(6)-羧基熒光素尸胺;5(6)-FAM cadaverine

5-羧基熒光素尸胺;5-FAM cadaverine

5-異硫氰酸熒光素尸胺;5-FITC cadaverine

5(6)-TAMRA尸胺;5(6)-TAMRA cadaverine

5-TAMRA尸胺;5-TAMRA cadaverine

6-TAMRA尸胺;6-TAMRA cadaverine

以上資料來自小編zhn2022.03.11

溫馨提示：僅用于科研