一種用于生產(chǎn)糖甘油脂(GGL)的工程大腸桿菌菌株使用生殖支原體的MG517糖脂合酶將糖基從UDPGlc轉(zhuǎn)移到甘油二酰基受體(Mora-Buyé et al., 2012)。胞內(nèi)甘油二酰基池是GGL生成的限制因素。在這里,我們?cè)O(shè)計(jì)了不同的代謝工程策略,通過調(diào)節(jié)脂肪酸、酰基供體和磷脂酸的生物合成來提高糖脂合酶前體底物的可用性。德莎的淘汰賽,褪色和fabR基因參與脂肪酸降解,超表達(dá)的轉(zhuǎn)錄監(jiān)管機(jī)構(gòu)FadR,酰基轉(zhuǎn)移酶的PlsB和C,和焦磷酸酶鼎暉磷脂酸生物合成,以及磷酸酶PgpB轉(zhuǎn)換為二酰基甘油進(jìn)行了探討,目的是改善GGL滴度。在不同的工程菌株中,MG517共表達(dá)的ΔtesA菌株和融合的PlsCxPgpB蛋白的產(chǎn)量最高,與單獨(dú)表達(dá)MG517的親本菌株相比,GGL滴度提高了350%。通過過表達(dá)尿苷轉(zhuǎn)移酶GalU或敲除udp -糖二磷酸酶編碼基因ushA來提高UDPGlc的**性并沒有進(jìn)一步提高GGL的效價(jià)。大多數(shù)菌株產(chǎn)生的GGL含有從單糖到四糖的不同數(shù)量的葡萄糖基單位。有趣的是,共表達(dá)Cdh的菌株GGL譜向二糖基化脂質(zhì)轉(zhuǎn)移(占GGLs總量的80%),而fadR敲除的菌株具有更多的不飽和酰基鏈。在所有情況下,GGL的產(chǎn)生改變了大腸桿菌膜的脂質(zhì)組成,觀察到GGL取代磷脂酰乙醇胺來維持膜的總體電荷平衡。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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