檢測抗體藥物偶聯(lián)物ADC的藥物抗體偶聯(lián)比（DAR）值的方法

抗體藥物偶聯(lián)物 (ADC) 的制備方法是通過化學(xué)方法將具有生物活性的小分子藥物與單克隆抗體相連，ADC 通過結(jié)合細(xì)胞*性藥物與靶標(biāo)特異性抗體將細(xì)胞*性藥物直接送達(dá)病變組織，同時限制藥物在非目標(biāo)組織中的*性。

 抗體藥物偶聯(lián)物 (ADC) 是一種蛋白質(zhì)——通常為單克隆抗體 (mAb)——通過ADC交聯(lián)劑共價結(jié)合（偶聯(lián)）到小分子藥物。 

ADC藥物的清除率都與藥物抗體偶聯(lián)比（DAR）值有關(guān)，因此在藥物開發(fā)過程中必須對其分析。尺寸排阻色譜法和疏水色譜法是在生理?xiàng)l件下檢測DAR的兩種常用的方法。

通過SEC-MS和HIC-UV法來對一個半胱氨酸偶聯(lián)的ADC藥物模擬物進(jìn)行分析。該模擬物是由LC-SMCC交聯(lián)劑將丹磺?；灩鈭F(tuán)共價鍵合到IgG1-mAb上，形成一個載藥量不同（0-8）的抗體混合物。我們選用了TSKgel SuperSW3000尺寸排阻色譜柱。將ADC注入該色譜柱中，HPLC系統(tǒng)與質(zhì)譜相連，在SEC-MS方法中，用于檢測DAR譜圖。從譜圖中觀察到，每個主峰之間的分子量差異為1336 Da，對應(yīng)兩個丹磺?；鶡晒鈭F(tuán)分子的分子量。SEC/MS分析表明，平均DAR為3.9 。

ADC模擬物的SEC/MS譜圖

然后，使用TSKgel Butyl-NPR疏水色譜柱和UV檢測，來確認(rèn)DAR分布情況。mAb抗體結(jié)合的藥物分子數(shù)越多，ADC的疏水性越大，在HIC固定相上的保留時間長，載藥量不同的組分便可得到分離。從DAR譜圖中可以看到，DAR=0-8的各峰之間分離情況很好。

ADC模擬物的HIC-UV譜圖

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Thiol-PEG-Tetrazine-5

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Boc-amino-PEG3-SS-acid

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APN-PEG4-PFP

APN-PEG4-tetrazine

APN-PEG4-DBCO

APN-PEG4-BCN

PTAD-PEG4-N3

PTAD-PEG4-alkyne

PTAD-PEG4-amine

Methylcyclopropene-PEG3-amine

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