檢測抗體藥物偶聯物ADC的藥物抗體偶聯比（DAR）值的方法

抗體藥物偶聯物 (ADC) 的制備方法是通過化學方法將具有生物活性的小分子藥物與單克隆抗體相連，ADC 通過結合細胞*性藥物與靶標特異性抗體將細胞*性藥物直接送達病變組織，同時限制藥物在非目標組織中的*性。

 抗體藥物偶聯物 (ADC) 是一種蛋白質——通常為單克隆抗體 (mAb)——通過ADC交聯劑共價結合（偶聯）到小分子藥物。 

ADC藥物的清除率都與藥物抗體偶聯比（DAR）值有關，因此在藥物開發過程中必須對其分析。尺寸排阻色譜法和疏水色譜法是在生理條件下檢測DAR的兩種常用的方法。

通過SEC-MS和HIC-UV法來對一個半胱氨酸偶聯的ADC藥物模擬物進行分析。該模擬物是由LC-SMCC交聯劑將丹磺酰基螢光團共價鍵合到IgG1-mAb上，形成一個載藥量不同（0-8）的抗體混合物。我們選用了TSKgel SuperSW3000尺寸排阻色譜柱。將ADC注入該色譜柱中，HPLC系統與質譜相連，在SEC-MS方法中，用于檢測DAR譜圖。從譜圖中觀察到，每個主峰之間的分子量差異為1336 Da，對應兩個丹磺酰基熒光團分子的分子量。SEC/MS分析表明，平均DAR為3.9 。

ADC模擬物的SEC/MS譜圖

然后，使用TSKgel Butyl-NPR疏水色譜柱和UV檢測，來確認DAR分布情況。mAb抗體結合的藥物分子數越多，ADC的疏水性越大，在HIC固定相上的保留時間長，載藥量不同的組分便可得到分離。從DAR譜圖中可以看到，DAR=0-8的各峰之間分離情況很好。

ADC模擬物的HIC-UV譜圖

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Methylcyclopropene-PEG3-amine

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