DSPE-PEG-Nb助力納米*體脂質(zhì)體構(gòu)建及其在光熱增強(qiáng)T細(xì)胞*中的應(yīng)用

鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s12951-024-02781-1

作者：謝申霞,韋石,段斯良,黃夏寧,劉愛群,侯曉瓊,林宣東,鐘丹妮,孫書陽,丁自強(qiáng),楊小梅,陳曉媛&路曉玲 

摘要：

背景：基于T細(xì)胞的免疫療法在募集和激活針對(duì)實(shí)體瘤的*特異性T細(xì)胞方面面臨巨大挑戰(zhàn)。其中，利用納米*體（Nb）或納米*體（Nbs）構(gòu)建T細(xì)胞銜接器已成為增強(qiáng)T細(xì)胞**效力的更具實(shí)用價(jià)值的方法。本研究設(shè)計(jì)了一種新型Nb介導(dǎo)的多功能T細(xì)胞銜接器（Nb-MuTE），它不僅可以將效應(yīng)T細(xì)胞募集到*組織中，還能與光熱效應(yīng)協(xié)同作用，有效激活T細(xì)胞的**免疫功能。

結(jié)果：Nb-MuTE 是基于吲哚菁綠 (ICG) 脂質(zhì)體構(gòu)建的，表面結(jié)合了 CD105 和 CD3 Nbs，表現(xiàn)出對(duì)*和 T 細(xì)胞均具有*的靶向性，能夠增強(qiáng)*特異性 T 細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子分泌。值得注意的是，在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，ICG 誘導(dǎo)的光熱效應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)了 Nb-MuTE 介導(dǎo)的 T 細(xì)胞的免疫**功能。

結(jié)論：這種新平臺(tái)Nb-MuTE為臨床*實(shí)體*增強(qiáng)T細(xì)胞反應(yīng)提供了一種實(shí)用的“一體化”策略。

節(jié)選：

CD105/CD3 Nb-LipoICG的制備及純化

脂質(zhì)體 (Lipo) 采用略加修改的薄膜水化方法制備。簡(jiǎn)而言之，將二硬脂酰磷脂酰膽堿 (DSPC; Aladdin，中國(guó))、膽固醇琥珀酸單酯 (Chol; Aladdin，中國(guó)) 和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇 2000 (DSPE-PEG-2000; Aladdin，中國(guó)) 以 3:2:0.015 的摩爾比溶于圓底燒瓶中的氯仿和甲醇 (4:1 (v/v) ) 的混合溶液中。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在 50 oC下完全蒸發(fā)混合溶劑。形成的脂質(zhì)膜用 1×PBS 緩沖液復(fù)水至總脂質(zhì)的終濃度為 2 mg/mL，然后用 0.22 μm 針濾器過濾。通過孔徑為 100 nm 的聚碳酸酯膜（Nuclepore，美國(guó)加利福尼亞州普萊森頓）的多次擠壓步驟（至少 10 次）使脂質(zhì)體尺寸均勻化。

將5 mg/mL的ICG-甲醇溶液按質(zhì)量梯度加入到脂質(zhì)混合物中，同法制備包覆ICG的納米脂質(zhì)體（LipoICG），上Sephadex G-50葡聚糖凝膠柱除去未包覆的游離ICG。將功能性Nb修飾的LipoICG（CD105/CD3 Nb-LipoICG）分別將CD105 Nb和CD3 Nb與DSPE-PEG2000-NHS共孵育，NHS基團(tuán)在4 ℃下與CD105 Nb和CD3 Nb上的氨基發(fā)生親核取代反應(yīng)，形成穩(wěn)定的酰胺鍵，繼續(xù)攪拌24 h后形成DSPE-PEG-Nb膠束。

將形成的DSPE-PEG-Nb膠束加入LipoICG中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下反應(yīng)10min，放入微孔板恒溫振蕩器（德國(guó)Eppendorf公司）中，以緩慢的振蕩速度在4℃下孵育12h，用Sephadex G-50柱除去游離的未結(jié)合的Nb。

西安齊岳生物提供相關(guān)產(chǎn)品：

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DSPE-PEG-Silane

DSPE-PEG-SP2-AA

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