FITC-胰蛋白酶(Fluorescein Isothiocyanate-labeled Trypsin)是胰蛋白酶(Trypsin)與熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC)共價結合形成的熒光標記酶。
胰蛋白酶是一種廣泛使用的蛋白水解酶,主要用于切割蛋白質的特定肽鍵,而FITC作為一種綠色熒光染料,通過其異硫氰酸基團與胰蛋白酶的賴氨酸殘基等氨基形成共價鍵,實現胰蛋白酶的熒光標記。
組成與性質
胰蛋白酶(Trypsin)
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,能夠選擇性地切割賴氨酸和精氨酸的羧基端肽鍵,常用于生物化學和分子生物學研究中的蛋白質消化、細胞脫離等過程。
FITC標記
FITC分子通過異硫氰酸基團與胰蛋白酶的游離氨基共價結合,賦予胰蛋白酶熒光特性,激發波長約490 nm,發射波長約520 nm,便于熒光檢測。
性質特點
熒光活性
FITC-胰蛋白酶具有強烈的綠色熒光信號,便于在熒光顯微鏡、流式細胞術及熒光板讀數儀中檢測。
酶活性保留
經過FITC標記后,胰蛋白酶通常保留其酶學活性,能夠繼續執行蛋白水解功能,但標記程度過高可能對活性有一定影響。
水溶性好
FITC-胰蛋白酶在水溶液中穩定,適合多種生物實驗條件。
共價結合穩定
FITC與胰蛋白酶形成的硫脲鍵較為穩定,保證熒光信號的持久性,但需注意避免強光照射和極端pH以防熒光淬滅。
使用注意事項
保存條件
FITC-胰蛋白酶應避光保存,通常置于4℃冷藏,以保持酶活性和熒光強度。
緩沖液選擇
使用適宜的緩沖體系(pH 7-8)以維持酶的穩定性和熒光性能。
酶活性監測
標記后需確認酶活性,避免因標記過度導致活性喪失。
避免光漂白
操作時避免長時間強光照射,減少熒光淬滅現象。
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