DSPE-PEG-DBCO 與某疊氮分子結(jié)合的合成實(shí)驗(yàn)步驟

以下是 DSPE-PEG-DBCO 與疊氮分子結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)擊化學(xué)合成實(shí)驗(yàn)步驟，適用于水相體系中的偶聯(lián)反應(yīng)，如構(gòu)建靶向脂質(zhì)體、納米藥物載體、或表面修飾材料。

一、反應(yīng)概述（無(wú)銅點(diǎn)擊 SPAAC 反應(yīng)）

反應(yīng)類型： 應(yīng)變促進(jìn)疊氮-炔烴環(huán)加成（SPAAC）
核心反應(yīng)：
DSPE-PEG-DBCO + R–N? → DSPE-PEG-Triazole-R

二、所需材料

1. 原料化合物

2. 溶劑與緩沖液（視應(yīng)用選擇）

去離子水、PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.2–7.5）

DMSO（如疊氮分子難溶時(shí)，可少量溶于 DMSO）

三、實(shí)驗(yàn)步驟

步驟 1：準(zhǔn)備反應(yīng)體系

溶解 DSPE-PEG-DBCO

將其溶于 PBS 或 HEPES 緩沖液中，濃度通常為 1–5 mg/mL

若難溶可先溶于少量 DMSO，再稀釋至所需體積

溶解 R–N?（疊氮化物）

若為小分子（如 N?-糖/N?-染料），直接溶于水或少量 DMSO

若為蛋白或寡核苷酸，應(yīng)在合適緩沖液中溶解

步驟 2：反應(yīng)混合與孵育

按摩爾比 1:1.2（DSPE-PEG-DBCO:R–N?） 混合

室溫或 37°C 反應(yīng) 2–4 小時(shí)

避光操作（如涉及熒光探針）

示例：

DSPE-PEG-DBCO (100 μL, 2 mg/mL)

+ N?-Cy5 (10 μL, 1 mM)

→ 混合總量至 200 μL，PBS緩沖液中反應(yīng) 2 小時(shí)

步驟 3：產(chǎn)物純化

根據(jù) R–N? 分子大小選擇合適方式：

步驟 4：分析與驗(yàn)證

UV-Vis/NIR：監(jiān)測(cè) DBCO 峰消失、新熒光峰生成

FTIR/質(zhì)譜：確認(rèn)三唑環(huán)形成

DLS、Zeta、電鏡：用于脂質(zhì)體/納米粒穩(wěn)定性驗(yàn)證

流式細(xì)胞術(shù)、共聚焦顯微鏡：用于靶向功能驗(yàn)證（如含熒光染料）

四、注意事項(xiàng)

五、典型實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考（示例）

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