DSPE-PEG2000-TCO 與 Tetrazine 修飾分子的偶聯實驗方案或構建脂質體修飾方法
下面是 DSPE-PEG2000-TCO 與含 Tetrazine（四嗪）官能團分子的偶聯實驗方案，適用于構建靶向脂質體、納米粒、表面修飾平臺等應用。
實驗名稱
DSPE-PEG2000-TCO 與 Tetrazine-功能分子的生物正交偶聯反應實驗
一、實驗目的
通過反式環辛烯（TCO）-四嗪（Tetrazine）生物正交反應，將 DSPE-PEG2000-TCO 與含 Tetrazine 的小分子、蛋白質或熒光探針等進行快速、高效、特異性的共價偶聯，構建靶向功能脂質材料或納米平臺。
二、材料與試劑
名稱 | 規格 | 說明 |
DSPE-PEG2000-TCO | ≥95%，粉末或2 mg/mL 溶液 | 脂質-聚合物修飾劑 |
Tetrazine 修飾分子（如 Tetrazine-熒光探針、Tetrazine-適配體） | 可溶于水或DMSO | 應具備親水性與目標識別能力 |
PBS緩沖液（pH 7.4） | 1×，無菌過濾 | 保持生理反應環境 |
DMSO（如有需要） | 分析純 | 溶解 Tetrazine 分子 |
超濾離心管（MWCO 10 kDa） | 0.5 mL/2 mL | 純化反應產物 |
三、實驗步驟
① 反應準備
將 DSPE-PEG2000-TCO 溶解于 PBS 或水中，濃度設定為：0.5–1 mg/mL
將 Tetrazine-修飾分子溶解于 PBS 或少量 DMSO 中（確保 DMSO 含量不超過總體系的 5%）
按摩爾比 1:1.2（TCO : Tetrazine）混合兩者
② 反應條件
溫度：25°C（室溫）
反應時間：15–60 分鐘（通常30分鐘足夠）
避光操作：TCO 和部分 Tetrazine 探針對光敏感
③ 產物純化
采用 超濾離心（10 kDa 截留） 去除未反應的游離 Tetrazine 探針；
可根據用途進一步純化（如透析、SEC）或用于后續脂質體構建。
四、結果表征（可選）
方法 | 用途 |
紫外-可見吸收光譜（UV-Vis） | 判斷探針是否成功偶聯 |
動態光散射（DLS） | 若用于脂質體，檢測粒徑變化 |
傅里葉紅外光譜（FTIR） | 驗證共價鍵形成（可選） |
熒光光譜或成像 | 若偶聯熒光探針，可用于功能驗證 |
五、應用延伸
1. 構建脂質體表面功能化：
將 DSPE-PEG2000-TCO 融入脂質體（與DSPC、膽固醇混合，薄膜水化法）
然后加入 Tetrazine-功能分子，直接在脂質體表面反應
快速偶聯，無需催化，無需高溫
2. 構建細胞膜標記探針：
將 DSPE-PEG2000-TCO 加入細胞培養液，嵌入細胞膜
然后加入 Tetrazine-熒光探針，即可標記細胞表面
注意事項
項目 | 建議 |
避光操作 | TCO 和 Tetrazine 對光敏感，建議避光反應 |
不可高溫 | 避免 >40°C，TCO 會降解 |
避免氧化 | 可充氮保存，TCO 對氧也較敏感 |
立即使用產物 | 產物建議當天使用或低溫保存（-20°C） |
相關反應背景
此類 TCO-Tetrazine 屬于 SPAAC（Strain-Promoted Inverse-Electron-Demand Diels–Alder Cycloaddition）；
無需催化劑，對活細胞、組織友好；
常用于納米材料修飾、蛋白偶聯、原位標記、藥物遞送。
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