新型蛋白質支架DNA四分體引發交聯雜交鏈反應(cHCR)的遞送和miRNA成像

一種新型蛋白質支架DNA四分體，該DNA四分體由鏈霉抗生物素蛋白(SA)和四個生物素化的發夾DNA探針構建。納米結構在其表面上修飾有致密的DNA探針，可能會因為高位阻核酸的擴增，而DNA四分體上僅修飾四個DNA探針，結構相對松散，有利于引發交聯雜交鏈反應(cHCR)從而進行核酸遞送和miRNA成像。

圖文解析

方案1(A) DNA四分體引發cHCR及(B)細胞內miRNA超靈敏成像示意圖。分別在SA上合成Cy3標記的H1和Cy5標記的H2的DNA四分體，在目標miRNA存在情況下，H1被打開與H2發生HCR形成3D交聯的水凝膠網絡，在cHCR產物中，Cy3熒光供體和Cy5受體距離被拉近發生FRET；在靶標miRNA不存在的情況下，H1和H2之間不發生cHCR，同時也無法觀察到FRET信號。

圖1(A)四種SA-DNA復合物的瓊脂糖凝膠（3％）電泳圖像；(B)H2和DNA四分體的熒光各向異性；(C)游離SA和DNA四分體的Zeta電位。SA是具有四個生物素結合位點的四聚體蛋白質，可以獲得四種類型的SA-DNA復合物(SA與DNA比例分別為1：1、1:2、1:3、1:4)，從圖中可以得出，不同濃度比的DNA與SA得到分子量不同的四個條帶(圖A)，說明形成了四種不同的復合物，熒光各向異性分析和zeta電位分析同時也驗證了DNA探針與SA之間的相互作用(圖B、C)。

圖2 (A)L-02細胞與SA-Cy3孵育；(B)與修飾有H4和SA-Cy3的DNA四分體孵育；(C)與修飾有H2-Cy5和SA的DNA四分體孵育；(D-F)與修飾H2-Cy5和SA-Cy3 DNA四分體孵育，Cy3通道、Cy5通道以及merge熒光圖像。從圖中可以得出，DNA四分體能夠在沒有轉染試劑的幫助下進入細胞，并且DNA四分體能在細胞中保持結構完整。

圖3(A)載有H2的DNA四分體與HeLa細胞孵育不同時間的流式細胞術分析；(B)不同濃度載有H2的DNA四分體與HeLa細胞孵育的流式細胞術分析；(C)不同孵育時間的載有H2的DNA四分體的亞細胞定位成像。如圖所示，在15min內能觀察到基本的熒光峰值，45min左右達到飽和，說明DNA四分體的遞送(圖3A)；熒光強度隨DNA四分體濃度的增加而增加(圖3B)；從亞細胞定位成像結果可以看出，孵育時間從15min增加到60min，Cy5熒光逐漸增加并從溶酶體擴散到細胞質中(圖3C)；這些結果表明DNA四分體是核酸遞送平臺，同時具有較高的溶酶體效率。

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ANB-NOS交聯劑 60117-35-3 N-5-疊氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亞胺

BMPS交聯劑 55750-62-4 N-（?-馬來酰亞胺丙氧基）琥珀酰亞胺酯

EMCS交聯劑 55750-63-5 N- [e-馬來酰亞胺基己酰氧基]琥珀酰亞胺酯

GMBS交聯劑 80307-12-6 N- [γ-馬來酰亞胺丁酰氧基]琥珀酰亞胺

LC-SPDP交聯劑 158913-22-5 琥珀酰亞胺基6-（3- [2-吡啶基二硫代]-丙酰胺基）己酸酯

MBS交聯劑 58626-38-3 間馬來酰亞胺基苯甲酰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯

PDPH交聯劑 1171706-57-2 3-[2-吡啶基二硫代]丙酰肼

SBA交聯劑 42014-51-7 N-琥珀酰亞胺基溴乙酸酯

SIA交聯劑 39028-27-8 N-琥珀酰亞胺碘乙酸酯； NHS-碘乙酸酯

Sulfo-SIA交聯劑 108906-15-6 N-磺基琥珀酰亞胺碘代乙酸鹽

SMCC交聯劑 64987-85-5 琥珀酰亞胺基-4- [N-馬來酰亞胺基甲基]環己烷-1-羧酸酯

SMPB交聯劑 79886-55-8 N-琥珀酰亞胺基4[4馬來酰亞胺基苯基]丁酸酯

SMPH交聯劑 367927-39-7 琥珀酰亞胺-6- [?-馬來酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯

SPDP交聯劑 68181-17-9 N-琥珀酰亞胺基3- [2-吡啶基二硫代]-丙酸酯

Sulfo-LC-SPDP交聯劑 169751-10-4 磺基琥珀酰亞胺基63[2吡啶基二硫代]丙酰胺基）己酸酯

Sulfo-MBS交聯劑 92921-25-0 間馬來酰亞胺基苯甲酰基-N-羥基磺基琥珀酰亞胺酯

Sulfo-SANPAH交聯劑 102568-43-4 N磺基琥珀酰亞胺6[4疊氮基-硝基苯基氨基]己酸酯

Sulfo-SMCC交聯劑 92921-24-9 磺基琥珀酰亞胺基-4- [N-馬來酰亞胺基甲基]環己烷-1-甲酸

BS2G交聯劑 / 雙[磺基琥珀酰亞胺基]戊二酸酯

BS3交聯劑 82436-77-9 辛二酸雙[磺基琥珀酰亞胺

DSG交聯劑 79642-50-5 戊二酸二琥珀酰亞胺基

DSP交聯劑 57757-57-0 二硫代雙[琥珀酰亞胺丙酸酯

DSS交聯劑 68528-80-3 辛二酸二琥珀酰亞胺酯

DSSeb交聯劑 23024-29-5 癸二酸二琥珀酰亞胺酯

DST交聯劑 62069-75-4 酒石酸二琥珀酰亞胺酯

DTSSP交聯劑 81069-02-5 3,3′-二硫代雙[磺基琥珀酰亞胺基丙酸酯]

EGS交聯劑 70539-42-3 乙二醇雙（琥珀酰亞胺基琥珀酸酯）

Sulfo-EGS交聯劑 167410-92-6 乙二醇雙（磺基琥珀酰亞胺基琥珀酸酯）

小編：wyf 05.06