液相分離(親水性和疏水性)和質譜聯用的技術鑒定老鼠以及酵母中的同位素代謝物。
研究方向有:質譜蛋白質組學和代謝組學、阿爾茨海默病的分子發病機制、泛素和蛋白質組Turnover和**癥的系統生物學。
高通量非靶向代謝組學通常依賴于互補液相色譜-質譜(LC-MS)方法來擴大各種代謝物的覆蓋范圍,但這些方法的集成尚無法完全表征。我們系統地研究了8種LC-MS設置,不同固定相(HILIC和C18),流動相(酸性和堿性pH)下親水相互作用液相色譜(HILIC)-MS和納流反相液相色譜(nRPLC)-MS的性能)和MS電離模式(正負)。之前曾報道過nRPLC-MS的優化,但我們在HILIC-MS(2.1 mm×150 mm)中發現,通過從2 mg細胞/組織樣本。由于峰特征受到污染物的高度損害,因此我們使用穩定同位素標記的酵母來增強配方鑒定,以比較不同的LC-MS條件。8種LC-MS設置可檢測總共1050個配方,其中**組合分別為4種,3種和2種LC-MS可以回收78%,73%和62%的配方。此外,在存在或不存在氮饑餓的情況下收集這些酵母樣品,從而能夠對比較的配方和代謝物結構進行定量比較,然后使用選定的合成代謝物進行驗證。
結果表明,氮饑餓會下調氨基酸成分,但會上調尿苷相關的代謝。
用兩種不同的液相分離(親水性和疏水性)和質譜聯用的技術,鑒定老鼠以及酵母中的同位素代謝物。設定了較佳的鑒定參數,并且對正常酵母和氮饑餓的酵母樣品,進行同位素代謝組學鑒定。
反相液相色譜法(reverse-phase liquid chromatography,RPLC)是代謝組學中較常見和實用的一種LC分離方法。但是缺點是對于強極性物質保留較差。親水相互作用液相色譜(hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC)是近年來色譜領域研究的熱點之一。
它通過采用強極性度固定相,并且結合高比例有機相和低比例水相作為流動相。此前文章報道的RPLC和HILIC是主要集中在特征峰的數目方面,還沒有文章系統比較這兩種方法在代謝組學上的鑒定和分析。