SOSG證實(shí)能用來(lái)檢測(cè)溶液和植物組織中的單線態(tài)氧(1O2)。

　　活性氧引起的許多生理?yè)p傷都可能歸因于單線態(tài)氧(1O2)，包括與脫氧鳥(niǎo)苷選擇性反應(yīng)形成8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)的核酸修飾。單線態(tài)氧的壽命足夠長(zhǎng)(水中有4.4μs)使其能夠充分?jǐn)U散進(jìn)入細(xì)胞和組織。單線態(tài)氧通過(guò)在1270nm處具弱化學(xué)發(fā)光的**特征直接被檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室中通常用三種之一的方法來(lái)生成單線態(tài)氧：

　　①使用感光染料對(duì)二氧(3O2)進(jìn)行光化學(xué)反應(yīng)來(lái)制備;

　　②通過(guò)對(duì)一種過(guò)氧化物或二氧環(huán)丁烷進(jìn)行加熱分解制備;

　　③氧氣流內(nèi)通過(guò)微波放電來(lái)制備。

　　SOSG高度選擇性結(jié)合單線態(tài)氧(1O2)。不像其他的熒光和化學(xué)發(fā)光的單線態(tài)氧檢測(cè)試劑，SOSG與其他活性氧物質(zhì)(ROS)，包括羥基自由基(·OH)、超氧陰離子(·O2–)和一氧化氮(NO)無(wú)可見(jiàn)反應(yīng)【見(jiàn)圖1】。

　　A)用熒光光度計(jì)(Ex/Em= 488/525nm)測(cè)定溶液內(nèi)的熒光，溶液內(nèi)含SOSG(1μM)和亞甲基藍(lán)(10μM)溶于100mMpH 7.5 Tris Buffer;單線態(tài)氧清除劑疊氮鈉(NaN3，1 mM);或50%D2O(重水，能夠延長(zhǎng)1O2的壽命)。每20s完成一次熒光測(cè)定，每次測(cè)定間隔30s(如灰條標(biāo)示)。在這30s的間隔中，樣本暴露于激光輻射(630–680 nm，<5 mW)，導(dǎo)致亞甲基藍(lán)光敏生成1O2。

　　B)用熒光光度計(jì)(Ex/Em=488/525nm)測(cè)定溶液內(nèi)的熒光，溶液為50mM pH 7 Tris buffer，1mM黃嘌呤，SOSG(1μM)，或含SOSG(1μM)，或含二氫羅丹明123。約20s之后，加入50 mU/mL黃嘌呤氧化酶(XO)。XO催化黃嘌呤的氧化，產(chǎn)生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬間被H2O2降解。

　　熒光特征：

　　SOSG與單線態(tài)氧(1O2)反應(yīng)前，探針最初發(fā)弱藍(lán)色熒光，激發(fā)峰在372nm和393nm，發(fā)射峰在395nm和416nm。當(dāng)含單線態(tài)氧(1O2)，探針發(fā)射綠色熒光，光譜特征類(lèi)似于熒光素(**激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)約504/525nm)。

　　線性化關(guān)系：

　　SOSG的熒光產(chǎn)物在某些溶液中隨著時(shí)間被降解，且在不含單線態(tài)氧的堿性pH溶液中，SOSG會(huì)發(fā)熒光。不過(guò)，當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)牟僮鳎G色熒光信號(hào)的強(qiáng)度與單線態(tài)氧(1O2)含量相關(guān)，且不會(huì)受其他ROS的明顯干擾。

　　使用方法：

　　1.SOSG儲(chǔ)存液制備：收到貨按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇來(lái)制備儲(chǔ)存液，每100μg粉末加入33μL甲醇制備~5mM儲(chǔ)存液。正式實(shí)驗(yàn)前制備工作液，不能用完的工作液需丟棄，不可保存后再用。

　　2.溶液檢測(cè)：SOSG不具細(xì)胞膜滲透性，設(shè)計(jì)用來(lái)檢測(cè)溶液環(huán)境內(nèi)的單線態(tài)氧。**的稀釋緩沖液和工作濃度需根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。建議起始工作濃度為1-10μM。

　　保存：-20℃避光干燥保存，**期至少6個(gè)月

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